Le Signorine narra di due sorelle zitelle, Rosaria (Isa Danieli) e Addolorata (Giuliana De Sio), entrambe affette da poliomielite, che insieme gestiscono una piccola storica merceria in un vicolo di Napoli, ormai circondata da empori cinesi e fast food mediorientali, e trascorrono la propria esistenza in un continuo e scoppiettante scambio di accuse reciproche